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AGS3双切口酶质粒(m) | sc-426766-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Gpsm1 编码 G 蛋白信号激活因子 3(AGS3)。AGS3 是一种多结构域调控蛋白,可通过其 GoLoco 基序与装载 GDP 的 Gαi/o 亚基结合,并在不依赖经典 GPCR 激活的情况下调节异源三聚体 G 蛋白的循环。AGS3 会影响第二信使信号传导和受体转运,从而塑造下游通路,控制细胞极性、囊泡动力学以及细胞骨架组织。在神经系统中,AGS3 与突触可塑性以及对神经调质线索的适应性反应相关;而在其他组织中,它参与对增殖与迁移行为的情境依赖性调控。涉及 AGS3 的 G 蛋白信号网络失衡,常被用于研究神经行为表型以及与肿瘤生物学相关的信号重编程,因此 Gpsm1 是进行机制性通路解析的有用靶点。
AGS3 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Gpsm1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Gpsm1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Gpsm1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Gpsm1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。