Plasmide Double Nickase (h) AGRP: sc-402410-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AGRP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AGRP Double Nickase (h) et le plasmide AGRP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AGRP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AGRP Antibody (MM0085-32B12): sc-517457
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AGRP | sc-402410-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AGRP | sc-402410-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGRP code pour la protéine agouti-related (AGRP), un neuropeptide principalement produit par des neurones hypothalamiques, qui agit comme antagoniste endogène/agoniste inverse des récepteurs des mélanocortines, en particulier MC3R et MC4R. En s’opposant à la signalisation des mélanocortines, AGRP contribue à réguler l’homéostasie énergétique, le comportement alimentaire et les réponses neuroendocriniennes via des voies interconnectées impliquant des peptides dérivés de la POMC ainsi que des circuits sensibles à la leptine et à l’insuline. Une altération de la signalisation d’AGRP a été impliquée dans une dérégulation du contrôle de l’appétit et de la régulation du poids corporel, et AGRP est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie des maladies métaboliques et des circuits hypothalamiques. En tant que peptide sécrété, AGRP constitue également un modèle accessible pour étudier la maturation des neuropeptides, leur sécrétion et la signalisation médiée par les récepteurs dans les systèmes neuronaux.
AGRP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGRP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGRP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGRP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGRP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.