AGRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419045

Übersicht

Das Agouti-Related-Neuropeptid (AGRP), kodiert durch das Mausgen *Agrp*, ist ein orexigenes Neuropeptid, das überwiegend in Neuronen des Nucleus arcuatus exprimiert wird, die die Energiebilanz und das Fressverhalten regulieren. AGRP wirkt als endogener Antagonist oder inverser Agonist an Melanocortinrezeptoren, insbesondere MC3R und MC4R, und wirkt damit anorexigenen Melanocortin-Signalen entgegen, um Appetit, Fettmasse und Stoffwechselrate zu modulieren. *Agrp*-exprimierende Neuronen integrieren endokrine und nährstoffbezogene Signale und sind mit hypothalamischen Schaltkreisen verknüpft, die die Glukosehomöostase und neuroendokrine Ausgänge steuern. Eine Fehlregulation AGRP-assoziierter Signalwege wird häufig in Modellen für Adipositas, metabolisches Syndrom, diabetesassoziierte Phänotypen und stressbedingte Veränderungen des Nahrungsaufnahmeverhaltens untersucht.

Das AGRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Agrp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Agrp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Agrp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AGRP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Agrp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AGRP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Agrp-Exone abzielen, die für die AGRP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Agrp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AGRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AGRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Agrp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AGRP HDR-Plasmid (m) und AGRP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Agrp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Agrp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.