Agrin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401256

Descripción general

AGRN codifica agrina, un gran proteoglicano de heparán sulfato de la matriz extracelular que organiza la señalización célula–matriz y la especialización de la membrana. En contextos neuromusculares y neuronales, la agrina coordina la formación y estabilización de sinapsis al interactuar con receptores como LRP4 y activar la señalización dependiente de MuSK, favoreciendo el agrupamiento de receptores de acetilcolina y la maduración sináptica. Más allá de la sinaptogénesis, la agrina influye en la remodelación del citoesqueleto, la adhesión y la mecanotransducción mediante interacciones con distroglicano e integrinas, moldeando la arquitectura tisular. La desregulación de la expresión o el procesamiento de AGRN se ha asociado con defectos en la unión neuromuscular y una homeostasis sináptica alterada, y también se estudia en vías vinculadas con fibrosis, neurodegeneración y la remodelación del microambiente tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Agrin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AGRN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AGRN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AGRN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Agrin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AGRN para la investigación de la señalización de Agrin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AGRN críticos para la función de Agrin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AGRN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Agrin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Agrin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AGRN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Agrin (h) y el plásmido HDR Agrin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AGRN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AGRN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.