Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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AGR2 Plasmide Double Nickase (m): sc-423838-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AGR2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AGR2 Double Nickase Plasmid (m) e il AGR2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Agr2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AGR2 Antibody (6C5): sc-101211
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AGR2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423838-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Agr2 del topo codifica anterior gradient 2 (AGR2), un fattore simile a una isomerasi delle proteine disolfuro residente nel reticolo endoplasmatico (RE), che supporta il ripiegamento ossidativo delle proteine e l’omeostasi della via secretoria. AGR2 contribuisce ai programmi di proteostasi del RE, inclusi la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR) e il controllo qualità delle proteine client destinate alla secrezione o alla localizzazione di membrana. Attraverso queste funzioni, AGR2 influenza la differenziazione epiteliale, la maturazione delle mucine e le dinamiche di interazione cellula–cellula nei tessuti con elevata richiesta secretoria. Un’espressione deregolata di AGR2 è stata collegata all’adattamento allo stress e a una segnalazione alterata in modelli di disfunzione epiteliale e di biologia tumorale, rendendo Agr2 un nodo utile per studiare lo stress del RE, la proteostasi e la regolazione delle reti secretorie.
AGR2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Agr2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Agr2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Agr2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Agr2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.