Plasmide Double Nickase (h) AFAP-1L1: sc-407503-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AFAP-1L1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AFAP-1L1 Double Nickase (h) et le plasmide AFAP-1L1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AFAP1L1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AFAP-1L1 Antibody (D-6): sc-514788
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AFAP-1L1 | sc-407503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AFAP-1L1 | sc-407503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AFAP1L1 code pour AFAP-1L1, une protéine adaptatrice associée aux filaments d’actine qui relie des complexes de signalisation au remodelage du cytosquelette. AFAP-1L1 participe à des processus tels que l’organisation des fibres de stress, la dynamique des adhérences focales et les changements de forme cellulaire, via des interactions qui couplent la signalisation des kinases de la famille Src à la machinerie de régulation de l’actine. En modulant les programmes d’adhérence et de motilité, AFAP1L1 est fréquemment étudié dans le contexte du comportement invasif, de phénotypes de type transition épithélio-mésenchymateuse (TEM) et de modèles de dissémination métastatique. Des altérations de l’expression d’AFAP1L1 ou de l’engagement de ses voies ont été rapportées dans de nombreux types de tumeurs, ce qui étaye son intérêt comme nœud pour des études mécanistiques portant sur la migration et les réseaux de signalisation du cytosquelette.
AFAP-1L1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AFAP1L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AFAP1L1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AFAP1L1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AFAP1L1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.