Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ADRP Double Nickaseプラスミド (h): sc-400802-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ADRP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ADRPダブルニカースプラスミド（h）およびADRPダブルニカースプラスミド（h2）は、PLIN2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ADRP 抗体 (B-6): sc-377429
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ADRP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADRP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLIN2は、脂肪細胞分化関連タンパク質（ADRP）をコードしている。ADRPは脂質滴に局在するペリリピンファミリーの一員で、中性脂質を貯蔵するオルガネラの表面を被覆し、脂肪酸の輸送、トリグリセリドの蓄積、ならびに脂肪分解（リポリシス）を制御する。ADRPは、PPARシグナル伝達や細胞の栄養感知経路により制御される脂質合成プログラムとの相互作用を介して、脂質滴の形成（生合成）とターンオーバーに関与し、酸化代謝や炎症応答のあり方に影響を与える。PLIN2発現の変化と脂質滴の蓄積は、肝脂肪化、肥満に伴う代謝機能障害、マクロファージの泡沫細胞形成、がん細胞における脂質ストレスといった文脈でしばしば研究されている。細胞内脂質貯蔵のマーカーかつ制御因子として、ADRPはヒト細胞モデルにおいて脂質恒常性、オルガネラ動態、代謝リプログラミングを解析するために広く用いられている。
ADRP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PLIN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PLIN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PLIN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PLIN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。