ADRP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400802-ACT

PLIN2 codifica a proteína relacionada à diferenciação do tecido adiposo (ADRP), uma perilipina associada a gotículas lipídicas que reveste os depósitos de lipídios neutros e regula sua estabilidade, renovação e o acesso por lipases. A ADRP ajuda a coordenar o manejo intracelular de triglicerídeos e ésteres de colesterol, conectando a biogênese de gotículas lipídicas ao balanço energético celular, às respostas ao estresse oxidativo e à sinalização metabólica. A alteração da expressão de PLIN2 está associada a fenótipos de acúmulo lipídico observados em disfunções metabólicas e estados inflamatórios, sendo frequentemente estudada em contextos de esteatose hepática, formação de células espumosas na aterosclerose e metabolismo lipídico tumoral. Como marcador da dinâmica de armazenamento de lipídios, a ADRP é amplamente usada para investigar vias que controlam captação de ácidos graxos, esterificação e lipofagia.

ADRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLIN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLIN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLIN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADRP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLIN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADRP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADRP em células tumorais com expressão de PLIN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.