ADPN Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-406096-NIC

PNPLA3 codifica a adiponutrina (ADPN), uma fosfolipase do tipo patatina localizada em gotículas lipídicas, que regula a hidrólise de triglicerídeos e a atividade de aciltransferase em hepatócitos e adipócitos. A ADPN integra sinais nutricionais e hormonais para modular a remodelação de lipídios, o acoplamento à lipogênese de novo e a renovação das gotículas lipídicas, conectando o estado metabólico ao armazenamento intracelular de lipídios. Variações genéticas e alterações na expressão de PNPLA3 estão fortemente associadas ao acúmulo de gordura no fígado e à progressão de fenótipos de doença hepática gordurosa, sendo estudadas no contexto de esteatose, inflamação e sinalização fibrogênica. Como resultado, PNPLA3/ADPN é amplamente utilizado como um ponto de entrada molecular para investigar vias do metabolismo lipídico e suas respostas de estresse a jusante em modelos celulares humanos.

ADPN O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PNPLA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PNPLA3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PNPLA3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PNPLA3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.