AdoMetDC Double Nickaseプラスミド (h): sc-404514-NIC

AMD1は、ヒトのS-アデノシルメチオニン脱炭酸酵素（AdoMetDC）をコードしている。AdoMetDCはポリアミン生合成における律速酵素であり、スペルミジンおよびスペルミン産生に用いられる脱炭酸S-アデノシルメチオニンを生成する。AdoMetDCは細胞内ポリアミンプールの調節を通じて、翻訳、クロマチン構造、DNA複製、細胞周期進行に影響を与え、AMD1の活性を成長制御や細胞ストレス応答と結び付けている。ポリアミン代謝の破綻や、AMD1の発現・活性の変化は、複数の疾患文脈で認められる増殖性の表現型や代謝リプログラミングと関連しており、経路解析のための機構的な結節点（ノード）としての有用性を支持する。代謝のゲートキーパーとして、AMD1はしばしばオルニチン脱炭酸酵素や、ポリアミンの分解／輸送経路と関連付けて研究され、恒常性維持のフィードバックや下流の遺伝子発現への影響をマッピングする目的で用いられる。

AdoMetDC ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AMD1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AMD1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AMD1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AMD1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。