ADM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419009

Panoramica

L’adrenomedullina (ADM) è un peptide vasoattivo secreto codificato dal gene murino *Adm*, che segnala principalmente attraverso il complesso del recettore simile al recettore della calcitonina (calcitonin receptor-like receptor) con RAMP2 o RAMP3, attivando risposte dipendenti da cAMP/PKA. Contribuisce alla regolazione del tono vascolare, alla funzione di barriera endoteliale, all’angiogenesi e all’omeostasi idroelettrolitica, e può modulare la segnalazione infiammatoria nelle cellule endoteliali e immunitarie. L’attività dell’ADM interseca programmi responsivi all’ipossia e vie di adattamento allo stress che influenzano la perfusione e il rimodellamento dei tessuti. Un’espressione o una segnalazione di ADM disregolate sono state associate alla biologia di malattie cardiometaboliche e infiammatorie, inclusi disfunzione vascolare correlata all’ipertensione e risposte microvascolari alterate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adm in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adm insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adm a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adm per lo studio della segnalazione di ADM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adm critici per la funzione di ADM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adm per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ADM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adm. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ADM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adm per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adm definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.