Adipsin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401782

Descripción general

El factor D del complemento (CFD), también conocido como adipsina, es una proteasa de serina que regula la vía alternativa del complemento al escindir el factor B cuando está unido a C3b, lo que favorece el ensamblaje de la convertasa de C3 y amplifica la activación del complemento. En humanos, el CFD se expresa de forma elevada en el tejido adiposo y conecta la vigilancia inmunitaria innata con la homeostasis metabólica, influyendo en el tono inflamatorio y en la señalización de adipocinas. La actividad alterada del CFD se ha asociado con una inflamación desregulada impulsada por el complemento y se ha estudiado en el contexto del remodelado del tejido adiposo, rasgos cardiometabólicos y lesión tisular mediada por el sistema inmunitario. Como enzima secretada, la adipsina constituye un punto accesible para analizar la comunicación cruzada entre la proteólisis del complemento, las redes de citocinas y las respuestas celulares al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Adipsin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CFD en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CFD junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CFD tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Adipsin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CFD para la investigación de la señalización de Adipsin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CFD críticos para la función de Adipsin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CFD para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Adipsin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Adipsin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CFD. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Adipsin (h) y el plásmido HDR Adipsin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CFD para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CFD definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.