Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAMTS-8: sc-405463-ACT

ADAMTS8 code une métalloprotéinase sécrétée, dépendante du zinc, de la famille ADAMTS, qui remodèle la matrice extracellulaire en clivant les protéoglycanes et des substrats apparentés. L’activité d’ADAMTS-8 contribue à la régulation de l’architecture tissulaire, de la migration cellulaire et de la signalisation locale au sein des microenvironnements stromaux et vasculaires, l’associant aux interactions MEC–récepteur et au renouvellement de la matrice médié par des protéases. Une expression dérégulée a été rapportée dans des contextes d’inflammation, de remodelage vasculaire et de modifications du microenvironnement associé aux tumeurs, où une composition matricielle altérée peut influencer des phénotypes angiogéniques et invasifs. En conséquence, ADAMTS8 est fréquemment étudiée comme modulateur de la protéolyse extracellulaire et de la signalisation médiée par la matrice dans des modèles pertinents pour les maladies.

ADAMTS-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAMTS8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAMTS-8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAMTS8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAMTS8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAMTS-8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAMTS8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAMTS-8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAMTS-8 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAMTS8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.