ADAM8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407606-NIC

ADAM8（a disintegrin and metalloproteinase 8）は膜に固定されたプロテアーゼで、細胞周囲のタンパク質分解（ペリセルラー・プロテオリシス）、エクトドメインシェディング、ならびに細胞―細胞／細胞―細胞外マトリックス（ECM）相互作用を調節します。ADAM8はそのメタロプロテアーゼドメインとディスインテグリンドメインを介して、白血球の接着・遊走、細胞外マトリックスのリモデリング、炎症性シグナル伝達に影響し、組織障害応答を統合的に制御する経路群に組み込まれています。ADAM8の発現変化は、慢性炎症性疾患や複数の腫瘍の文脈で観察される免疫細胞トラフィッキングの破綻や、プロテアーゼ駆動性の微小環境変化と関連づけられており、浸潤や転移関連過程、免疫調節の研究における機序的ハブとしての有用性を支持します。これらの特性により、ADAM8はヒト細胞におけるプロテオリティックなシグナルネットワークや細胞表面受容体制御を解析するうえで重要な標的となります。

ADAM8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADAM8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADAM8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADAM8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADAM8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。