ADAM7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-418992-KO-2

Übersicht

Adam7 kodiert ADAM7, ein katalytisch inaktives Mitglied der ADAM‑Familie (a disintegrin and metalloprotease), das nicht als Protease, sondern als membranassoziierter Modulator von Adhäsion und Signalübertragung fungiert. Bei der Maus ist ADAM7 im männlichen Reproduktionstrakt angereichert und beteiligt sich über Protein‑Protein‑Interaktionen sowie die Koordination von Zelloberflächen‑Rezeptorkomplexen an der Spermienreifung und an Spermium‑Eizell‑Interaktionen. Es trägt zur Membranorganisation und zu Prozessen der Zell‑Zell‑Kommunikation bei, die sich mit Signalwegen überschneiden, welche Wechselwirkungen mit der extrazellulären Matrix und die Dynamik zellulärer Adhäsion steuern. Eine Fehlregulation von ADAM‑Familienmitgliedern wird allgemein mit verändertem Gewebeumbau und entzündlicher Signalgebung in Verbindung gebracht, wodurch Adam7 ein nützlicher Lokus für mechanistische Studien der Reproduktionsbiologie und von Zelloberflächen‑Signalnetzwerken ist.

Das ADAM7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adam7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adam7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adam7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ADAM7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adam7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ADAM7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adam7-Exone abzielen, die für die ADAM7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adam7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ADAM7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ADAM7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adam7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ADAM7 HDR-Plasmid (m) und ADAM7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adam7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adam7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.