ACSL3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403546-NIC

ACSL3（アシルCoA合成酵素・長鎖ファミリー3）は小胞体に局在する酵素で、長鎖脂肪酸をアシルCoAチオエステルへと活性化します。これは脂質生合成および脂肪酸利用に必須のステップです。ACSL3は脂肪酸をリン脂質や中性脂質の産生へと導くことで、膜リモデリング、脂質滴（リピッドドロップレット）形成、さらには細胞増殖やストレス適応に関連する広範な代謝プログラムに影響を与えます。その活性は、脂肪酸取り込み、小胞体の脂質恒常性、ミトコンドリアへの脂質供給を制御する経路と相互に関わり、エネルギー代謝やシグナル伝達における脂質の利用可能性を左右します。ACSL3の制御異常は、代謝の再配線、脂質関連炎症、腫瘍化（オンコジェニック・トランスフォーメーション）といった文脈で研究されており、脂肪酸の活性化が表現型を規定する脂質プロファイルの形成に寄与し得ることが示唆されています。

ACSL3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACSL3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACSL3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACSL3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACSL3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。