ACOT8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407262-ACT

ヒトACOT8はペルオキシソーム局在のアシルCoAチオエステラーゼをコードしており、アシルCoAエステルを遊離脂肪酸とCoAに加水分解することで、アシルCoAプールのバランス調整とCoAの利用可能性の維持に寄与します。ペルオキシソームでの脂質処理を制御することにより、ACOT8は脂肪酸β酸化、脂質リモデリング、ならびに過酸化水素を産生するペルオキシソーム代謝に結び付いた酸化還元恒常性に影響を与えます。ACOT8の活性は、ペルオキシソーム‐ミトコンドリア間クロストークや、栄養・酸化ストレスに対する細胞応答を調整するより広範な代謝プログラムとも交差します。ペルオキシソームの脂質代謝やCoA恒常性の破綻は、代謝機能障害やペルオキシソーム関連疾患の病態と関係しており、脂質駆動性の細胞表現型を検討する研究においてACOT8を標的とする意義を支持します。

ACOT8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACOT8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACOT8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACOT8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACOT8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACOT8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACOT8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACOT8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACOT8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACOT8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。