ACADS Plasmide Double Nickase (h): sc-405458-NIC

ACADS codifica la deidrogenasi degli acil-CoA a catena corta, una flavoproteina mitocondriale che catalizza il passaggio iniziale di deidrogenazione nella β-ossidazione degli acil-CoA di acidi grassi a catena corta, collegando il catabolismo degli acidi grassi alla produzione di energia durante il digiuno e lo stress metabolico. Trasferendo elettroni al sistema della flavoproteina di trasferimento degli elettroni e ai componenti a valle della catena respiratoria, ACADS contribuisce al mantenimento dell’equilibrio redox mitocondriale e a un flusso efficiente attraverso le vie di ossidazione degli acidi grassi. Un’alterata funzione di ACADS è associata a una compromissione dell’ossidazione degli acidi grassi a catena corta, ad acidosi metabolica e a sintomi neuromuscolari osservati nella carenza di deidrogenasi degli acil-CoA a catena corta, rendendola rilevante per studi sugli errori congeniti del metabolismo. ACADS rappresenta inoltre un nodo utile per indagare il metabolismo mitocondriale, le risposte allo stress ossidativo e la segnalazione derivata dai lipidi nelle cellule umane.

ACADS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACADS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACADS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACADS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACADS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.