ACADS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418940

Panoramica

Acads codifica l’acil-CoA deidrogenasi a catena corta (ACADS), una flavoproteina mitocondriale che catalizza il primo passaggio di deidrogenazione nella β-ossidazione degli acidi grassi a catena corta. Sostenendo la produzione di acetil-CoA e il flusso a valle nel ciclo TCA (di Krebs), ACADS contribuisce a mantenere l’omeostasi energetica durante il digiuno e l’utilizzo di diete ricche di grassi, e si integra con l’equilibrio redox tramite il trasferimento di elettroni dipendente da FAD. L’alterazione dell’attività di ACADS è associata all’accumulo di acil-CoA a catena corta e a profili di acilcarnitine modificati, rendendola rilevante per gli errori congeniti dell’ossidazione degli acidi grassi e per fenotipi di stress metabolico. Nei modelli murini, Acads viene comunemente studiato in fegato, cuore, muscolo scheletrico e tessuto adiposo bruno per comprendere il metabolismo mitocondriale, il sensing dei nutrienti e il bilancio energetico sistemico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACADS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acads in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acads insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acads a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACADS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acads per lo studio della segnalazione di ACADS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acads critici per la funzione di ACADS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acads per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACADS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACADS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acads. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACADS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACADS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acads per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acads definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.