ABCG5CRISPR激活质粒(m): sc-424275-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ABCG5 CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- ABCG5 CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 ABCG5 CRISPR 激活质粒 (m) 和 ABCG5 CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Abcg5 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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ABCG5CRISPR激活质粒(m) | sc-424275-ACT | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Abcg5 基因编码 ATP 结合盒（ABC）转运蛋白 ABCG5。ABCG5 与 ABCG8 形成异源二聚体，在肠上皮细胞和肝细胞的顶端膜介导甾醇外排。该转运体复合物可限制肠道对膳食甾醇的吸收，并促进胆汁中胆固醇和植物甾醇的分泌；同时与包括核受体调控和胆汁酸代谢在内的脂质稳态通路相互衔接。ABCG5 依赖性转运受损会改变甾醇转运与分配，并促成与血脂异常相关的表型，因此 Abcg5 是研究肠—肝轴调控脂质平衡的重要靶点。基于 Abcg5 调控的体内与体外模型可用于机制研究，包括代谢应激、肝脏脂质处理以及甾醇驱动的炎症反应等。
ABCG5 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Abcg5的表达。
ABCG5 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Abcg5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Abcg5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ABCG5表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Abcg5位点，并能够研究内源性位点上依赖于ABCG5的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Abcg5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ABCG5通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。