ABCG1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-418933-ACT

マウスAbcg1は、ATP結合カセット（ABC）トランスポーターであるABCG1をコードしており、細胞内脂質恒常性の主要な調節因子として、コレステロールおよびリン脂質のHDLへの排出（エフラックス）を促進し、膜組成の維持に寄与します。ABCG1の活性はLXR/RXRによって駆動される転写プログラムと連動し、マクロファージの泡沫細胞形成、生体内の炎症シグナル、ならびに免疫・代謝組織における脂質代謝／取り扱いに影響を与えます。マクロファージでの役割に加えて、ABCG1は肺サーファクタントのバランスや、酸化ストレスおよび代謝ストレスに対する細胞応答にも関与します。そのため、ABCG1の発現や機能の破綻は、マウスモデルにおける動脈硬化関連経路、代謝性炎症、肺の脂質調節異常の研究において重要なテーマとなります。

ABCG1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Abcg1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCG1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Abcg1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAbcg1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAbcg1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAbcg1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。