ABCA3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402388-ACT

ABCA3（ATP結合カセット〔ABC〕トランスポーターサブファミリーAメンバー3）は主に肺胞II型上皮細胞に発現する脂質トランスポーターで、層板小体に局在し、サーファクタントリン脂質の輸送およびパッケージングを支えます。ATP依存性のABCトランスポーターとして、ABCA3は細胞内膜脂質の恒常性維持や、肺の生理機能に必須な小胞輸送過程に寄与します。ABCA3の機能障害または活性低下はサーファクタント代謝の異常と関連し、新生児呼吸窮迫や間質性肺疾患の表現型と結び付けられています。そのためABCA3の生物学は、層板小体形成、サーファクタントの処理、上皮細胞の分化およびストレス応答に関わる経路を中心に広く研究されています。

ABCA3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCA3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCA3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCA3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCA3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCA3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCA3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCA3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCA3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCA3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。