ABCA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405934

Visão geral

ABCA2 (membro 2 da subfamília A de transportadores ABC, “ATP-binding cassette”) é um transportador de lipídios associado à membrana, predominantemente localizado em compartimentos endossomais e lisossomais, onde contribui para o tráfego intracelular de colesterol e esfingolipídios. Como transportador ABC, o ABCA2 acopla a hidrólise de ATP à translocação de substratos, influenciando a dinâmica de vesículas, a composição de membranas e a homeostase lipídica. A expressão desregulada de ABCA2 e alterações no manejo de lipídios têm sido associadas a vias ligadas à neurodegeneração, incluindo o processamento da proteína precursora do amiloide e o equilíbrio lipídico neuronal. O ABCA2 também é estudado no contexto de respostas ao estresse celular e de fenótipos de transporte multidrogas, o que o torna relevante para investigações mecanísticas em modelos de câncer e do sistema nervoso.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ABCA2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ABCA2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ABCA2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ABCA2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ABCA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ABCA2 para a investigação da sinalização de ABCA2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ABCA2 críticos para a função ABCA2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ABCA2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ABCA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ABCA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ABCA2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ABCA2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ABCA2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ABCA2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ABCA2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.