A-Myb Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404328-ACT

MYBL1 codifica o fator de transcrição humano A-Myb, um membro da família MYB que se liga a motivos específicos de DNA para regular programas de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a proliferação específica de linhagens. A atividade de A-Myb se interconecta com redes transcricionais que governam a remodelação da cromatina, a expressão de genes associados à replicação e vias de sinalização do desenvolvimento, particularmente em tecidos com alta taxa proliferativa. A expressão desregulada ou rearranjos de MYBL1 foram relatados em múltiplas neoplasias e são frequentemente estudados pelo impacto na transcrição oncogênica, na identidade de células tumorais e na capacidade proliferativa. Como regulador a montante de redes gênicas, A-Myb oferece um ponto de partida útil para estudos mecanísticos de dependência de fatores de transcrição e de reconfiguração de vias.

A-Myb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYBL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

A-Myb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYBL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYBL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de A-Myb. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYBL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de A-Myb no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via A-Myb em células tumorais com expressão de MYBL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.