53BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-424212-KO-2

概要

Trp53bp1は、DNA損傷応答におけるクロマチン関連メディエーターである53BP1をコードしており、53BP1はヒストン修飾マークの認識とユビキチンシグナルを介して二本鎖切断（DSB）部位へ迅速にリクルートされます。53BP1は非相同末端結合（NHEJ）を促進し、DNA末端のリセクションを抑制することで、修復過程におけるNHEJと相同組換え（HR）の経路選択に影響を与えます。また、チェックポイントシグナル、ゲノム安定性、B細胞におけるクラススイッチ組換えを統括し、その機能不全は染色体不安定性の増大や複製ストレスに対する応答の変化と関連します。マウスモデルでは、Trp53bp1の撹乱は、ゲノム維持機構、腫瘍抑制ネットワーク、ならびにBRCA1に関連する修復経路バランスを研究するために広く用いられています。

53BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるTrp53bp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trp53bp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trp53bp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、53BP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、53BP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trp53bp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• 53BP1の機能に不可欠なTrp53bp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trp53bp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• 53BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）および53BP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trp53bp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  53BP1 HDRプラスミド（m）および 53BP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrp53bp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrp53bp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。