5-LO Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419091

Panoramica

Alox5 codifica la 5-lipossigenasi (5-LO), una diossigenasi del ferro non eme che catalizza i primi passaggi irreversibili nella biosintesi dei leucotrieni a partire dall’acido arachidonico. L’attività della 5-LO, coordinata con FLAP e con le sintasi a valle, guida la produzione di LTB4 e dei leucotrieni cisteinilici, che regolano la chemiotassi dei leucociti, la permeabilità vascolare e il tono bronchiale. Questa via si interseca con la segnalazione dell’immunità innata e con le reti di mediatori lipidici dell’infiammazione, influenzando la funzione di macrofagi e neutrofili, nonché l’equilibrio degli eicosanoidi. Una deregolazione della segnalazione Alox5/5-LO è stata collegata, in modelli murini, a fenotipi infiammatori delle vie aeree e allergici, all’infiammazione aterosclerotica e al rimodellamento del microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 5-LO (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Alox5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Alox5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Alox5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 5-LO.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Alox5 per lo studio della segnalazione di 5-LO, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Alox5 critici per la funzione di 5-LO
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Alox5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal 5-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal 5-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Alox5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal 5-LO Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR 5-LO (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Alox5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Alox5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.