Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
4E-BP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420149
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 4E-BP1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico 4E-BP1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:4E-BP1 Anticorpo (P-1): sc-9977
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
4E-BP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420149 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene murino **Eif4ebp1** codifica a **4E-BP1**, um represssor da tradução dependente de “cap” que se liga à **EIF4E** e limita a montagem do complexo **eIF4F**, ajustando assim a iniciação da tradução de mRNA em resposta a sinais de nutrientes e fatores de crescimento. A 4E-BP1 é um efetor central a jusante do eixo **PI3K–AKT–mTORC1**; sua fosforilação por **mTORC1** alivia o sequestro de **EIF4E** e promove a tradução seletiva de transcritos envolvidos no crescimento celular, metabolismo e adaptação ao estresse. Por meio desse ponto de controle translacional, **Eif4ebp1** contribui para a regulação da autofagia, da progressão do ciclo celular e de programas de proteostase. A sinalização desregulada de 4E-BP1 é amplamente utilizada como um marcador molecular de atividade aberrante da via **mTOR** em modelos de biologia do câncer, disfunção metabólica e processos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO 4E-BP1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Eif4ebp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Eif4ebp1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Eif4ebp1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína 4E-BP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Eif4ebp1 para a investigação da sinalização de 4E-BP1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Eif4ebp1 críticos para a função 4E-BP1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Eif4ebp1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo 4E-BP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo 4E-BP1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Eif4ebp1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo 4E-BP1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR 4E-BP1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Eif4ebp1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Eif4ebp1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.