20S Proteasome α7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401897-ACT

PSMA7 codifica a subunidade α7 do proteassoma 20S, um componente estrutural essencial da partícula central 20S que sustenta a montagem e o mecanismo de “gating” (abertura/fechamento) da câmara proteolítica no sistema ubiquitina–proteassoma. Ao permitir a degradação dependente de ATP de substratos poliubiquitinados pelo proteassoma 26S, PSMA7 contribui para a proteostase, a progressão do ciclo celular, o processamento de antígenos para apresentação por MHC classe I e a regulação de vias de sinalização responsivas ao estresse. A atividade do proteassoma cruza-se com a sinalização de NF-κB por meio da degradação de IκB e influencia vias de controle de qualidade proteica ligadas ao estresse oxidativo e às respostas a proteínas mal dobradas. A desregulação de subunidades do proteassoma, incluindo PSMA7, é frequentemente estudada em contextos de proliferação alterada, sinalização inflamatória e modelos de agregação proteica em doenças neurodegenerativas.

20S Proteasome α7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMA7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

20S Proteasome α7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMA7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMA7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 20S Proteasome α7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMA7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 20S Proteasome α7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 20S Proteasome α7 em células tumorais com expressão de PSMA7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.