17β-HSD Double Nickaseプラスミド (h): sc-402072-NIC

ヒトHSD17B1は、17β-HSD（17β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素1型）をコードしており、エストロンをより強力なエストロゲンであるエстраジオールへ変換する反応を触媒し、局所的なステロイドホルモン恒常性に寄与する主要な酸化還元酵素である。エストロゲン／アンドロゲンのバランスを調節することで、17β-HSDはステロイド生成および内分泌シグナル伝達経路に組み込まれ、細胞増殖・分化・代謝を制御する転写プログラムに影響を与える。HSD17B1の活性や発現の変化は、複数の組織におけるホルモン依存性の病態生理や、エストロゲンシグナルの制御異常と関連づけられている。そのためHSD17B1は、ステロイド代謝、受容体駆動性の遺伝子制御、ならびに内分泌関連疾患の作用機序を扱うモデルで広く研究されている。

17β-HSD ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSD17B1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSD17B1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSD17B1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSD17B1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。