Plasmide CRISPR d'Activation (h) 14-3-3 σ: sc-401096-ACT

SFN code pour la protéine adaptatrice humaine 14‑3‑3 sigma (σ), un régulateur induit par p53 qui coordonne la transduction des signaux en se liant à des motifs phosphosérine/phosphothréonine sur divers partenaires protéiques. Elle joue des rôles clés dans les points de contrôle de la réponse aux dommages de l’ADN, le contrôle du cycle cellulaire en G2/M et le maintien de la différenciation épithéliale, en influençant des voies qui gouvernent la prolifération, l’apoptose et les réponses au stress. En modulant la localisation et l’activité de régulateurs du cycle cellulaire et de kinases, 14‑3‑3 σ contribue à la stabilité génomique et à des programmes suppresseurs de tumeurs. Une expression dérégulée de SFN et son silençage épigénétique ont été rapportés dans de nombreux cancers et sont également pertinents pour des études sur la biologie des kératinocytes, la sénescence et la réponse au stress génotoxique.

14-3-3 σ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

14-3-3 σ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 14-3-3 σ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 14-3-3 σ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 14-3-3 σ dans les cellules tumorales présentant une expression de SFN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.