γ-sarcoglycan CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402275-ACT

SGCG は γ-サルコグリカンをコードしており、γ-サルコグリカンは、収縮時に筋細胞膜を安定化させるジストロフィン関連糖タンパク質複合体（dystrophin-associated glycoprotein complex；DGC）内のサルコグリカン複合体を構成する中核因子です。γ-サルコグリカンは、細胞骨格と細胞外マトリックスの連結（カップリング）に関与し、横紋筋における筋形質膜（サルコレマ）の完全性とメカノトランスダクションを支えます。SGCG が破綻するとサルコグリカン複合体の組み立てが乱れ、膜の安定性が損なわれることで、損傷関連シグナルの誘導、カルシウム恒常性の異常、ストレス応答性のリモデリングが促進されます。SGCG の機能不全は筋ジストロフィーの表現型と遺伝学的に関連しており、ジストロフィン‐糖タンパク質複合体の生物学や筋変性経路を研究する上で重要な標的となります。

γ-sarcoglycan CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SGCGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

γ-sarcoglycan CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SGCG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSGCG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性γ-sarcoglycanの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSGCG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるγ-sarcoglycan依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSGCG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるγ-sarcoglycan経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。