γF-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419833

概要

Crygf は、マウスの眼水晶体において非常に豊富に存在する構造タンパク質である γF-クリスタリンをコードしており、屈折率の維持、透明性、ならびに線維細胞の長期的な安定性を支えています。γ-クリスタリンは、緊密に詰み合った β シートドメインを特徴とし、高いタンパク質密度を実現しつつ光散乱を最小限に抑えることに寄与します。また、その維持は、シャペロンとの相互作用、レドックスバランス、限られたタンパク質ターンオーバーなどを含む、水晶体のプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークに依存しています。クリスタリンの組成や可溶性が乱れると、水晶体の構築が損なわれ、タンパク質凝集が促進され、実験モデルにおいて白内障様の混濁表現型への感受性が高まる可能性があります。したがって Crygf は、主として非分裂性（ポストミトティック）な組織環境における水晶体発生、線維細胞分化、ならびにタンパク質安定性の機構を研究するうえで有用な解析ノードとなります。

γF-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCrygf遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Crygf内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crygfのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γF-crystallinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γF-crystallinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Crygf欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γF-crystallinの機能に不可欠なCrygfエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crygfゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γF-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγF-crystallin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Crygf遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γF-crystallin HDRプラスミド（m）および γF-crystallin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrygfホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCrygf標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。