γ EnolaseCRISPR激活质粒(h): sc-400763-ACT

ENO2 编码人 γ-烯醇化酶（神经元特异性烯醇化酶，NSE），这是一种糖酵解金属酶，催化 2-磷酸甘油酸与磷酸烯醇式丙酮酸之间的相互转化，从而支持 ATP 生成和代谢通量。除代谢功能外，γ-烯醇化酶在神经元和神经内分泌细胞中富集，并与细胞应激反应、分化程序以及神经元完整性的维持相关。ENO2 的表达常用于研究神经内分泌谱系状态、代谢重编程以及疾病相关情境下的糖酵解异常变化，包括神经系统疾病与肿瘤生物学。作为中心碳代谢通路中的一个关键节点，ENO2 为探究糖酵解调控如何与氧化还原平衡及细胞状态调控相互衔接提供了一个便于切入的入口。

γ Enolase CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ENO2的表达。

γ Enolase CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ENO2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ENO2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性γ Enolase表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ENO2位点，并能够研究内源性位点上依赖于γ Enolase的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ENO2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟γ Enolase通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。