γENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422827

概要

Scnn1g は、上皮性ナトリウムチャネル（ENaC）の γ サブユニット（γENaC）をコードしており、上皮組織の頂端膜を介したアミロライド感受性 Na⁺ 流入を規定する主要因子です。γENaC は α および β サブユニットとともに、気道表面液の恒常性、腎でのナトリウム再吸収、体液量バランスに影響する経上皮性ナトリウム輸送を調節します。チャネル活性は、タンパク質分解によるプロセシングと膜輸送（トラフィッキング）によって制御され、アルドステロン応答性のプログラムや、Na⁺/K⁺-ATPase と共役した塩輸送などの下流のイオン輸送ネットワークと統合されています。ENaC サブユニットの調節異常は、上皮の水和や塩バランスの表現型変化と関連づけられており、気道・腎臓の生理や関連するイオン輸送障害の研究における重要性を示しています。

γENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScnn1g遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scnn1g内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scnn1gのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、γENaCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、γENaCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scnn1g欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• γENaCの機能に不可欠なScnn1gエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scnn1gゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• γENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびγENaC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scnn1g遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  γENaC HDRプラスミド（m）および γENaC HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScnn1gホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScnn1g標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。