γ1-Adaptin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403986-ACT

AP1G1 codifica a subunidade humana γ1-adaptina do complexo de proteínas adaptadoras 1 (AP-1), um componente central do revestimento que seleciona cargas e impulsiona a formação de vesículas mediada por clatrina na rede trans-Golgi e em endossomos. Ao reconhecer motivos de triagem em proteínas transmembrana, a γ1-adaptina ajuda a coordenar a reciclagem de receptores, o direcionamento aos lisossomos e o tráfego polarizado de membrana, influenciando assim a duração da sinalização e a composição da membrana. O tráfego dependente de AP-1 se conecta à maturação endossomal e às vias de autofagia–lisossomo, sustentando a proteostase e a secreção regulada. Alterações na função do complexo adaptador e na dinâmica do transporte vesicular são amplamente relevantes para pesquisas sobre fenótipos do neurodesenvolvimento, tráfego de receptores em células imunes e sinalização desregulada por fatores de crescimento observada em múltiplos contextos de doenças.

γ1-Adaptin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AP1G1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

γ1-Adaptin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AP1G1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AP1G1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de γ1-Adaptin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AP1G1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de γ1-Adaptin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via γ1-Adaptin em células tumorais com expressão de AP1G1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.