δENaC Double Nickaseプラスミド (h): sc-404577-NIC

SCNN1Dは上皮性ナトリウムチャネル（δENaC）のδサブユニットをコードしており、δENaCは電位依存性ではないアミロライド感受性のNa⁺チャネルとして、上皮を介したナトリウム吸収（経上皮性ナトリウム吸収）および膜電位の調節に寄与します。δENaCは他のENaCサブユニットと会合してチャネルのゲーティングやイオン選択性に影響を与え、上皮組織における電解質・体液恒常性の維持を支えます。ENaC活性は、プロテアーゼによるプロセシング、NEDD4Lによるユビキチン化、ならびにチャネルのトラフィッキングや開口確率に影響するシグナル入力によって制御されており、SCNN1Dは上皮輸送を制御する経路と関連づけられます。ENaC機能の変化は塩分・体液バランスの異常に関わる疾患で示唆されており、気道表面の水分保持や血圧関連の表現型との関連でも研究されています。

δENaC ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SCNN1D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SCNN1D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SCNN1Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SCNN1Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。