β Enolase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400843-ACT

ENO3 codifica a β-enolase humana, uma enzima glicolítica enriquecida no músculo que catalisa a interconversão de 2-fosfoglicerato e fosfoenolpiruvato, sustentando a produção de ATP durante elevada demanda metabólica. Como parte do metabolismo central do carbono, a β-enolase conecta a glicólise a uma homeostase energética mais ampla e pode influenciar o equilíbrio redox celular por meio do uso downstream do piruvato. Alterações na expressão de ENO3 e no fluxo glicolítico têm sido investigadas em contextos de disfunção do músculo esquelético, remodelação metabólica e mudanças associadas a doenças em direção à glicólise aeróbia. Assim, ENO3 é um marcador e modulador útil para estudos que relacionam o metabolismo energético a respostas ao estresse celular e a estados de diferenciação.

β Enolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ENO3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β Enolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ENO3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ENO3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β Enolase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ENO3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β Enolase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β Enolase em células tumorais com expressão de ENO3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.