β-defensin 124 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410392-ACT

DEFB124 codifica a β-defensina 124 humana, um pequeno peptídeo catiônico da família das defensinas que contribui para a imunidade inata epitelial por meio de atividade antimicrobiana direta e da modulação de respostas inflamatórias locais. As β-defensinas participam de processos da barreira mucosa e podem influenciar a sinalização quimiotática e redes de citocinas que moldam o recrutamento de leucócitos e as interações hospedeiro–microrganismo. Padrões alterados de expressão de defensinas têm sido associados à imunidade mucosa desregulada e a estados inflamatórios crônicos, sustentando a investigação de DEFB124 na biologia de infecções e na homeostase imune. Em contextos do trato reprodutivo e urogenital, membros da família das defensinas também são estudados por seus papéis na manutenção da integridade da barreira e do equilíbrio do microbioma.

β-defensin 124 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DEFB124 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-defensin 124 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DEFB124 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DEFB124, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-defensin 124. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DEFB124 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-defensin 124 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-defensin 124 em células tumorais com expressão de DEFB124 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.