β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419980

概要

Defb1はマウスβ-ディフェンシン1をコードしており、これは上皮細胞によって産生される小型のカチオン性抗菌ペプチドです。β-ディフェンシン1は、呼吸器・消化管・泌尿生殖器などのバリア表面に多く存在します。β-ディフェンシン1は、微生物に対する直接的な殺菌活性に加え、粘膜マイクロバイオームの構成を形成することで自然免疫防御に寄与し、さらに白血球の動員やサイトカインシグナル伝達に影響を与え得る免疫調節因子としても機能します。その発現は上皮分化プログラムや炎症応答と関連しており、Defb1はバリアの完全性や宿主—病原体相互作用を制御する過程と結び付いています。実験モデルではディフェンシン発現の変化が感染感受性や炎症性疾患様の表現型と関連することが示されており、粘膜免疫学および上皮恒常性の研究における重要性が支持されています。

β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDefb1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Defb1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Defb1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、β-defensin 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、β-defensin 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Defb1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• β-defensin 1の機能に不可欠なDefb1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Defb1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびβ-defensin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Defb1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  β-defensin 1 HDRプラスミド（m）および β-defensin 1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDefb1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDefb1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。