β1-Adaptin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402948
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- β1-Adaptin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico β1-Adaptin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
β1-Adaptin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402948 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
AP1B1 codifica a β1-adaptina, a subunidade β do complexo de proteínas adaptadoras 1 (AP-1), que acopla o reconhecimento de carga à formação de vesículas mediada por clatrina na rede trans-Golgi e nos endossomos. Ao ligar-se a motivos de triagem em proteínas transmembrana e ao coordenar-se com pequenas GTPases e fatores acessórios, o AP-1 regula o tráfego polarizado, a reciclagem endossomal e o transporte direcionado aos lisossomos, que sustentam a composição de membrana e a homeostase da sinalização. A perturbação da triagem dependente de AP1B1 afeta a polaridade epitelial e pode alterar a distribuição de receptores, a localização de transportadores de nutrientes e vias de proteostase ligadas a respostas de estresse celular. Variações genéticas em AP1B1 têm sido associadas a fenótipos relacionados ao neurodesenvolvimento e ao tráfego intracelular, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de disfunção no transporte vesicular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO β1-Adaptin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AP1B1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AP1B1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AP1B1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína β1-Adaptin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AP1B1 para a investigação da sinalização de β1-Adaptin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AP1B1 críticos para a função β1-Adaptin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AP1B1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo β1-Adaptin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo β1-Adaptin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AP1B1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo β1-Adaptin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR β1-Adaptin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AP1B1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AP1B1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.