α-Syntrophin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404039-ACT

SNTA1 codifica a α-sintrofina, uma proteína modular de ancoragem com domínio PDZ que organiza complexos multiproteicos na face interna da membrana plasmática, particularmente no complexo de glicoproteínas associado à distrofina no músculo estriado e em domínios de membrana especializados em células excitáveis. Ao acoplar canais iônicos, enzimas de sinalização e elementos do citoesqueleto, a α-sintrofina influencia a estabilidade da membrana, a localização de canais e processos de sinalização a jusante que moldam a excitabilidade celular e as respostas ao estresse. A ancoragem dependente de SNTA1 tem sido associada à regulação da sinalização de óxido nítrico por meio de complexos associados à nNOS e ao controle espacial de receptores e transportadores de membrana. A desregulação ou perturbação associada a variantes de SNTA1 é estudada no contexto da eletrofisiologia cardíaca, da biologia neuromuscular e de mecanismos que alteram microdomínios de sinalização na membrana.

α-Syntrophin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNTA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-Syntrophin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNTA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNTA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-Syntrophin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNTA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-Syntrophin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-Syntrophin em células tumorais com expressão de SNTA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.