α-internexin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402920

概要

INAは、神経細胞の中間径フィラメントタンパク質であるα-インターネキシンをコードしており、他のニューロフィラメントサブユニットとともにフィラメントネットワークを形成することで、細胞骨格構造や軸索径の維持に寄与します。発生期および成熟した神経細胞において中間径フィラメント系を組織化することで、神経突起の伸長、軸索の安定性、細胞内輸送を支えます。INA発現の変化やフィラメント構築の異常を含む中間径フィラメント動態の破綻は、神経細胞の脆弱性、軸索障害、タンパク質凝集を伴う神経変性過程との関連でしばしば検討されます。神経細胞に豊富な構造タンパク質として、α-インターネキシンは神経分化や細胞骨格リモデリングの研究におけるマーカーとして、また機序解明の足がかりとして広く用いられています。

α-internexin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるINA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、INA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、INAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、α-internexinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、α-internexinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、INA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• α-internexinの機能に不可欠なINAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、INAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• α-internexin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびα-internexin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、INA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  α-internexin HDRプラスミド（h）および α-internexin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはINAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のINA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。