Plásmido Doble Nickase (h) αB-crystallin: sc-401149-NIC

CRYAB codifica la αB-cristalina, una pequeña proteína de choque térmico que actúa como chaperona molecular independiente de ATP para estabilizar proteínas parcialmente desplegadas y limitar su agregación durante el estrés celular. Participa en redes de proteostasis junto con otras HSP y con las vías de ubiquitina–proteasoma y autofagia, y además modula la organización del citoesqueleto mediante interacciones con filamentos intermedios. La αB-cristalina se expresa en niveles elevados en el cristalino y se induce ampliamente en tejidos musculares y neuronales bajo estrés oxidativo, térmico y mecánico, lo que la vincula con la señalización de respuesta al estrés y la regulación de la apoptosis. La desregulación de la expresión o la función de CRYAB se ha asociado con la biología de las cataratas, con fenotipos de miopatía relacionada con desmina y cardiomiopatía, y con alteraciones de la proteostasis en contextos de enfermedades neurodegenerativas.

αB-crystallin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRYAB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRYAB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRYAB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRYAB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.