Plasmide Double Nickase (h) αB-crystallin: sc-401149-NIC

CRYAB code l’αB-cristalline, une petite protéine de choc thermique qui agit comme chaperon moléculaire indépendant de l’ATP afin de stabiliser les protéines partiellement dépliées et de limiter leur agrégation lors de stress cellulaires. Elle participe aux réseaux de protéostasie avec d’autres HSP ainsi qu’avec les voies ubiquitine–protéasome et autophagie, tout en modulant l’organisation du cytosquelette via des interactions avec les filaments intermédiaires. L’αB-cristalline est fortement exprimée dans le cristallin et largement induite dans les tissus musculaires et neuronaux sous stress oxydatif, thermique et mécanique, ce qui la relie à la signalisation de réponse au stress et à la régulation de l’apoptose. Une expression ou une fonction dérégulée de CRYAB a été associée à la biologie de la cataracte, à des phénotypes de myopathie liée à la desmine et de cardiomyopathie, ainsi qu’à une protéostasie altérée dans des contextes de maladies neurodégénératives.

αB-crystallin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRYAB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRYAB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRYAB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRYAB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.