α-actinin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-430958-KO-2

Descripción general

Actn1 codifica la α-actinina-1, una proteína de unión a actina insensible al Ca2+ que entrecruza la actina filamentosa y organiza las redes de actina cortical, las fibras de estrés y las estructuras citoesqueléticas asociadas a la adhesión. En células de ratón, la α-actinina-1 sostiene la dinámica de las adhesiones focales ligadas a integrinas, la mecanotransducción y la migración celular al coordinar la remodelación de la actina con centros de señalización como las GTPasas de la familia Rho. Por su papel en el mantenimiento de la tensión citoesquelética y la estabilidad de la membrana, ACTN1 es relevante para estudios sobre la biogénesis plaquetaria y la función hemostática, donde una arquitectura de actina alterada puede perturbar la formación de proplaquetas y la resiliencia del citoesqueleto. La desregulación de la función de la α-actinina-1 se ha asociado con trastornos plaquetarios hereditarios y con fenotipos más amplios relacionados con la adhesión y la arquitectura tisular, lo que convierte a Actn1 en un objetivo útil para modelar mecanismos de enfermedad impulsados por el citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-actinin-1 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Actn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Actn1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Actn1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-actinin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Actn1 para la investigación de la señalización de α-actinin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Actn1 críticos para la función de α-actinin-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Actn1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Actn1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-actinin-1 (m) y el plásmido HDR α-actinin-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Actn1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Actn1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.