α-2M Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402377-ACT

A2M codifica a α-2M, um grande inibidor pan-protease secretado que captura diversas proteases por meio de um mecanismo de “região-isca” e regula a proteólise extracelular. Ao ligar-se a citocinas e fatores de crescimento e ao interagir com a endocitose mediada por LRP1, a α-2M influencia a sinalização inflamatória, a remodelação tecidual e vias de depuração que moldam o meio extracelular. Essas atividades conectam o A2M a processos como a comunicação cruzada entre complemento e coagulação, a renovação da matriz e a proteostase no plasma e nos fluidos intersticiais. Alterações na expressão ou na função de A2M têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e metabólicos e foram estudadas em contextos que incluem neurodegeneração, biologia cardiovascular e remodelação relacionada à fibrose.

α-2M O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de A2M sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-2M O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus A2M em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição A2M, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-2M. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus A2M nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-2M no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-2M em células tumorais com expressão de A2M silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.