Plasmide CRISPR/Cas9 KO α1a Tubulin (h): sc-400022

Présentation

TUBA1A code l’α1a-tubuline, un isotype majeur d’α-tubuline qui s’hétérodimérise avec la β-tubuline pour former les microtubules, assurant l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et le fonctionnement du fuseau mitotique. La dynamique des microtubules, régulée par la composition en α/β-tubuline et par des protéines associées, coordonne des processus tels que la migration neuronale, le guidage axonal et le trafic vésiculaire. TUBA1A est particulièrement exprimé dans le système nerveux en développement, et des perturbations de la polymérisation ou de la stabilité des microtubules peuvent altérer les programmes du développement cortical. Des variants pathogènes de TUBA1A sont associés aux tubulinopathies et à des troubles du neurodéveloppement caractérisés par des malformations du développement cortical et une connectivité neuronale altérée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α1a Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBA1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBA1A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBA1A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α1a Tubulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBA1A pour l'étude de la signalisation de α1a Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBA1A essentiels à la fonction de α1a Tubulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBA1A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α1a Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le α1a Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBA1A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α1a Tubulin plasmide HDR (h) et le α1a Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBA1A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBA1A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.