Silenciadores Geneticos

Produtos para RNA de interferencia oferecidos pela Santa Cruz Biotechnology, Inc.

Silenciadores Geneticos tipo siRNA

siRNA description:

• O termo siRNA se refere ao pequeno RNA de interferencia ou RNA de interferencia curto
• Exige transfeccao de celulas usando um reagente de transfeccao lipidico
• Util para "knock-down" transitorio

siRNA product details:

• Silenciadores Geneticos siRNA sao "pools" de tres agentes especificos formados por moleculas de 19-25 nucleotides em fita dupla de RNA com a porcao 2-nt 3' livre em cada extremidade.
• 10 µ M, 50-100 transfeccoes
• Para verificar independentemente resultados de silenciamento de genes alvo, siRNA duplex individuais estarao disponiveis sob pedido.

Support Products for siRNA Gene Silencers:

• Anticorpos controle compativeis estao disponiveis
• RT-PCR Primers estao disponiveis
• siRNA Dilution Buffer, sc-29527
• siRNA Transfection Reagent, sc-29528
• siRNA Transfection Medium, sc-36868
• siRNA Reagent System, sc-45064
• Control siRNAs, including Control siRNA-A, sc-37007
• Control siRNA (FITC Conjugate)-A, sc-36869

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Como funcionam os silenciadores geneticos do tipo siRNA?

Download siRNA Protocols

FGF-19 siRNA (h): sc-39480

CD9 siRNA (h): sc-35032

Daxx siRNA (h): sc-35178

Cdc6 siRNA (h): sc-29258

cytochrome c siRNA (h): sc-29292

cPLA2 siRNA (h): sc-29280

ERK 1 siRNA (m): sc-29308

c-Src siRNA (h): sc-29228

p53 siRNA (h): sc-29435

Lamin A/C siRNA (h): sc-35776

Perguntas frequentes

• Quais sao as vantagens do uso de shRNA em comparacao com siRNA?

  A transfeccao de silenciadores geneticos tipo siRNA em celulas cultivadas resulta em uma rapida e eficiente reducao na expressao do gene alvo, apesar dessa reducao ser de curta duracao. Para aumentar a duracao da silenciacao genetica, usam-se plasmideos shRNA ou Particulas de Lentivirus de shRNA seguidos de selecao com puromicina. Portanto, se o alvo e a expressao de proteina de "turnover" lento, Plasmideo shRNA ou as Particulas de Lentivirus shRNA sao a opcao ideal.

• Qual e a diferenca entre usar Particulas de Lentivirus shRNA e usar Plasmideos shRNA?

  Para usar Plasmideos shRNA com o objetivo de silenciar genes alvo e necessario a transfeccao previa. Enquanto isso, as Particulas de Lentivirus shRNA ja se encontram prontas para infectar todo tipo de celula mamifera, incluindo-se celulas primarias e celulas nao-divisiveis. Ambos Plasmideos shRNA e Particulas de Lentivirus shRNA podem ser usados para o desenvolvimento de celulas de expressao de shRNA permanente apos o tratamento seletivo com puromicina. As particulas de lentivirus sao enviadas em gelo seco enquanto que os plasmideos shRNA sao enviados em gelo azul.

• Os produtos de lentivirus shRNA da Santa Cruz apresentam algum risco?

  Particulas de lentivirus podem ser utilizadas em laboratorios de nivel 2 de Biosseguranca em unidades de cultura celular (e deverao ser tratadas com o mesmo nivel de cautela utilizado para qualquer outro agente potencialmente infeccioso). As particulas de lentivirus sao replicantes-incompetentes e foram criadas para auto-inativacao apos transducao e integracao dos construtos de shRNA no DNA genomico das celulas alvo.

• As sequencias dos produtos de shRNA sao as mesmas daquelas relacionadas com os produtos de siRNA para o mesmo gene? Tais sequencias estao disponiveis?

  Sim. As sequencias que codificam os nossos Plasmideos shRNA sao as mesmas usadas nos correspondentes Silenciadores Geneticos tipo siRNA. Essas sequencias estao disponiveis aos clientes. Para isso, entre em contato com um de nossos representantes do Sercico Tecnico.

• Os Plasmideos shRNA sao fornecidos como um "pool" de 3-5 plasmideos. Sao os mesmos fornecidos separadamente? Os plasmideos shRNA de um pool de um mesmo produto podem ser vendidos separadamente?

  Os produtos tipo Plasmideo shRNA sao fornecidos em um unico recipiente (vial). Oferecemos as fitas de siRNA separadamente sob encomenda. No futuro, poderemos vir a oferecer os plasmideos separadamente.

• Qual o tipo o tipo de vetor para o lentivirus que voce usa?

  O vetor para o lentivirus usado foi construido para uso proprio e e propriedade privada da Santa Cruz. Por favor, entre em contato conosco e nos indique mais especificamente o que e por que voce necessita dessas informacoes. Acreditamos ser possivel responder suas perguntas sem comprometer nosso sigilo comercial.

• Que tipo de promotor e usado pelo vetor para a transcricao do shRNA?

  O vetor utiliza o promotor H1

• Que tipo de marcador para selecao existe no vetor?

  O vetor contem um gene resistente a puromicina que codifica a enzima puromicina N-acetiltransferase para a selecao das celulas transfectadas ou transduzidas com sucesso.

• Como e possivel propagar o plasmideo com vetor tipo lentivirus?

  Os Plasmideos shRNA e as Particulas de Lentivirus sao vendidas como produtos prontos para transfeccao/transducao. Nao ha necessidade de preparacoes adicionais. Silenciadores Geneticos shRNA sao produtos consumidos com o seu uso para os quais nao existem protocolos de propagacao.

• O que e copGFP e como essa pode ser util no uso de plasmideos shRNA e Particulas de Lentivirus?

  Com a administracao de plasmideo copGFP ou Particulas de Lentivirus copGFP em uma amostra separada de celulas alvo, e possivel identificar a transfeccao ou a eficiencia da transducao viral na populacao de celula alvo. O plasmideo e as Particulas de Lentivirus tipo copepod levam a expressao de Proteina Verde Fluorescente de copepoda, a qual pode ser detectada com o uso de microscopios fluorescentes ou citometria de fluxo.

• Qual e a diferenca entre os produtos shRNA (h) e (h2) (por example E-Caderina, sc-35242-SH e sc-44222-SH)?

  Os produtos (h) e (h2) sao designados para silenciar o mesmo gene, entretanto possuem sequencia diferentes.

• Quais os produtos auxiliares e reagentes de transfeccao devem ser adquiridos da SCBT para uso dos Pasmideos shRNA?

  Recomendamos nosso Reagente de Transfeccao DNA Plasmideo shRNA, sc-108061, com o Meio para Transfeccao DNA Plasmideo shRNA, sc-108062. Recomendamos ainda, nossos controles DNAs plasmideos shRNA, either sc-108060 (A), sc-108065 (B) or sc-108066 (C). Esses controles codificam sequencias de shRNA invertidas as quais nao sao capazes de atingir qualquer RNA mensageiro (mRNA) das celulas mamiferas.

Referencias

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