Electrophoresis Sample Buffer, 2X

O tampão de amostra de eletroforese, normalmente preparado a uma concentração de 2X, é um componente crucial utilizado em técnicas de eletroforese em gel, tais como SDS-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio) e eletroforese em gel de agarose. Este tampão tem vários objectivos: Desnaturação: O tampão de amostra contém normalmente agentes desnaturantes como o SDS, que rompe as estruturas secundárias e terciárias das proteínas, assegurando que estas adoptam uma forma linear e são uniformemente carregadas com base na sua massa. Estabilização: São incluídos tampões como Tris-HCl ou fosfato para manter um pH estável, garantindo condições óptimas para a migração de proteínas. Coloração: Corantes como o azul de bromofenol ou o azul de Coomassie são frequentemente adicionados ao tampão para visualizar a carga da amostra durante a eletroforese e para monitorizar o progresso da corrida. Agente redutor: No caso da SDS-PAGE, pode ser incluído um agente redutor, como o beta-mercaptoetanol ou o ditiotreitol (DTT), para quebrar as ligações dissulfureto e desnaturar totalmente as proteínas. A concentração 2X indica que o tampão é duas vezes mais concentrado do que o que é normalmente utilizado no gel. Isto permite que os investigadores misturem o tampão de amostra com a sua amostra numa proporção de 1:1, resultando numa concentração final de 1X adequada para o carregamento no gel. Em geral, o tampão de amostra para eletroforese com uma concentração de 2X é um componente crítico das experiências de eletroforese em gel, garantindo uma separação e visualização eficientes das proteínas ou ácidos nucleicos com base no seu tamanho e carga.