ZnT-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403951-ACT

SLC30A4 codifica o ZnT-4 (família SLC30), um transportador de efluxo de zinco que regula o zinco citosólico ao promover o sequestro de zinco em compartimentos intracelulares, moldando assim a atividade enzimática e a sinalização dependentes de zinco. Ao ajustar a disponibilidade de zinco, o ZnT-4 contribui para a homeostase de íons metálicos, o tráfego vesicular e o equilíbrio redox, processos que se cruzam com vias que controlam respostas ao estresse oxidativo e a função secretória. A desregulação do transporte de zinco tem sido amplamente associada a alterações na diferenciação celular, prejuízos na biologia dos grânulos secretórios e fenótipos inflamatórios e metabólicos, tornando o SLC30A4 um locus útil para estudos mecanísticos da fisiologia celular dependente de zinco. Pesquisas sobre o ZnT-4 sustentam investigações de como o zinco compartimentalizado influencia programas transcricionais e sinalização adaptativa ao estresse em células humanas.

ZnT-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC30A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZnT-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC30A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC30A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZnT-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC30A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZnT-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZnT-4 em células tumorais com expressão de SLC30A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.