ZNF750 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408278-ACT

ZNF750は亜鉛フィンガー型の転写因子をコードしており、上皮系譜へのコミットメントと終末分化を制御する主要な調節因子として機能する。とりわけ、角化細胞の成熟および重層上皮の恒常性維持に重要な役割を担う。ZNF750は、表皮バリア形成、細胞周期からの離脱、前駆細胞様状態の抑制に関連する転写プログラムを、分化関連遺伝子ネットワークを協調的に制御することで調節する。ZNF750発現の攪乱は、上皮分化の異常や増殖挙動の変化と関連づけられており、扁平上皮の生物学および関連疾患の機序研究において重要な対象となる。核内DNA結合タンパク質としてのZNF750は、組織特異的遺伝子発現を司る転写回路の解明に向けた解析しやすい結節点（ターゲット）を提供する。

ZNF750 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZNF750の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZNF750 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZNF750 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZNF750転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZNF750の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZNF750遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZNF750依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZNF750発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZNF750経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。